克伦特罗(瘦肉精)检测试剂盒 型号:LN006
简介
克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精，是一种β—兴奋剂。因其能改善脂肪型动物的肉与脂肪的比例，并能加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，并且可以残留在动物的体内。然而这种药物对人有严重的副作用，轻则导致心跳及心律不正常，重则可引发心脏病。目前，我国已禁止其使用。
本产品采用台湾的先进技术，由同一技术在台湾生产的同类产品是台湾畜产会唯一认可的快速检测产品，在台湾全岛广泛是使用。
传统的方法是取动物的尿液进行检测，但是由于尿样中的克伦特罗含量很不稳定，故而本公司研发的克伦特罗检测试剂盒，更加着重于对血清样本的检测，使检验结果更准确、更稳定；同时也可以对饲料、肌肉、组织等样品进行检测。本产品简化了样品处理方式，使用简便，省时省力省钱，整个操作过程不到90分钟，回收率为80%－120%，灵敏度可达到0.05ppb，是各类饲料企业、屠宰企业及各级政府检测机构的理想产品。
简单
1． 样品提取方便快捷。
2． 90分钟得到结果。
3． 只需基本的实验室设备。
4． 操作人员只需最基本的实验知识。
准确：
1． 结果重现性高。
2． 精确至0.05ppb。
3． 与其它抗体的交叉反应率极低。
技术支持：
我们为用户提供最方便、快捷、周到的服务。
产品规格
包装：每包96孔
灵敏度: 0.05ppb
测试区间：0.05ppb－4.05ppb
检测时间：80分钟(提取后)
储存条件：2-8℃
反应原理:
本产品主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来进行的。在整个反应完成后,样品中克伦特罗含量越多,反应呈色就越浅；反之,样品中克伦特罗含量越少,则呈色越深。
试剂盒组成：
1、微量测试孔:每条8孔，一板12条
2、克伦特罗标准溶液：
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb 各1瓶，1.5mL/瓶
3、10倍浓缩稀释/清洗缓冲液：2瓶，50mL /瓶
4、酶标记物(冻干态): 2瓶
5、底物溶液：1瓶，12mL/瓶
6、反应终止液：1瓶，13mL/瓶
试剂盒使用说明：
A、注意事项：
1、 将标准品、待测样品、10倍浓缩稀释/清洗缓冲液、酶标记物、微孔测试板、底物溶液，置于室温下，回温30分钟。
2、 原倍稀释/清洗缓冲液的配制
用蒸馏水将10倍浓缩稀释/清洗缓冲液以1:9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水)，即可作为酶标记物稀释液、样品稀释液与微孔板清洗液。
3、 酶标记物配制
在每瓶酶标记物中加入 mL的稀释液，震荡使其完全溶解，随即静置约5分钟后使用(溶解后的酶标记物若保存于-20℃，保存期可达1个月，若保存于4℃，请勿超过一个星期)。
4、 将剩余的微孔条放回铝箔袋中，以胶带封好储存于4℃。
B、检品制备：
1.若待测物为血清，则依以下方法进行处理(5倍稀释)
抽取待验动物血液，离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用，注意不要有溶血。
取0.1mL血清，加入0.4mL稀释液，涡旋1分钟，混匀。离心10分钟(3000rpm)，取上清液100uL 进行分析。
*若需要0.05ppb的灵敏度，则可直接取1mL血清进行管柱纯化，详细方法见(C、)
2.若待测物为肉类，则依以下方法进行处理(10倍稀释)
取4g已均质样品置入离心管中，再加入6mL 0.01N HCl，涡旋1分钟。静置1小时后，离心20分钟(3000rpm)，上清液与稀释液进行1:3(4倍)稀释后，取100uL进行分析。
*若需要0.05ppb的灵敏度，则可继续取稀释液3mL进行管柱纯化，详细方法见(C、)
3.若待测物为心、肝等器官，则依以下方法进行处理(10倍稀释、煮沸)
取4g已均质样品置入离心管中，再加入6mL 0.01N HCl，涡旋1分钟。静置1小时，以80℃水浴加热约3分钟，离心20分钟(3000rpm)。上清液与稀释液进行1:3(4倍)稀释后，取100uL进行分析。
*若需要0.05 ppb的灵敏度，可继续取稀释液3mL进行管柱纯化，详细方法见(C、)
4.若待测物为饲料，则依以下方法进行稀释(100倍稀释)
取1g已磨碎的待测饲料加入10mL稀释液，用力震荡。3000转离心10分钟后，取上清液 100uL，用稀释液做10倍稀释。取100uL进行分析。
C、管柱纯化(C18,500mg 3mL)
若利用C-18管柱进行样品纯化,可提升敏感度至0.05ppb,方法如下:
1. 以10mL甲醇洗涤管柱, 流速3mL/分。
2. 再以10mL蒸馏水洗涤管柱, 流速3mL/分。
3. 分析样品进入管柱(血清加入1mL, 肉类或内脏均质稀释后的上清液加入3mL)。(注)
4. 以10mL蒸馏水洗管柱, 流速3mL/分。
5. 利用减压真空装置干燥管柱10分钟。
6. 以2mL CH3CN洗涤管柱, 流速3mL/分。
7. 再利用减压真空装置干燥管柱10分钟。
8. 以2mL甲醇流出样品, 流速3mL/分。
9. 以50℃氮气流吹干样品后,加入稀释液溶解样品。(样品若是血清,则加入1mL稀释液,样品若是肉类或是内脏类,则加入300uL稀释液)。
10. 取100uL进行分析。
注: 分析样品进管柱之前必须先用1N NaOH调整到pH 9.0~9.5间!
D、操作步骤：
1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL已完成前处理的样品溶液。
3、再于每一微孔中另再加入50mL已完全回溶的酶标记物。
4、轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
5、将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。
6、最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。
7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，轻敲盘子四周，使其充分混合。
8、于室温下避光静置温育20分钟。
9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
10、用酶标仪于波长450nm下判读 。
E、判定
1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值为纵坐标，以标样浓度的对数值为横坐标，做标准半对数曲线。
3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。
4. 由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
F、标准曲线(如下图) 
G、再现性
针对克伦特罗检验试剂盒的精密度测试，重复6次，所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV)如下图所示，显示本产品有很高的再现性: 
H、特异性
针对以下药物进行特异性交叉反应测试，结果如下：
| 药物 | 特异性（%） |
| 克伦特罗 | 100 |
| 沙丁胺醇 | 143 |
| 特布他林 | 128 |
| 异丙特醇 | 41 |
经由上述表格换算,1ppb克伦特罗相当于0.70ppb沙丁胺醇, 0.78ppb特布他林,2.4ppb异丙特醇
I、回收率
| 样品(添加克伦特罗浓度) | 回收率% | 样品(添加克伦特罗浓度) | 回收率% |
| 肉类（1.0 ppb） | 90 ~ 120 | 血清（1.25 ppb） | 90 ~ 120 |
| 肝（2.5 ppb） | 90 ~ 130 | 饲料（2.0 ppb） | 80 ~ 115 |
